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可调控基因编辑细胞系定制

       Tet-On诱导型基因表达系统是调控哺乳动物细胞中目的基因定时表达的常用工具之一。当体系中存在四环素或其类似物时,目的基因将出现快速高水平表达;当除去四环素或其类似物时,目的基因则几乎或完全沉默。此外,该系统有效的剂量依赖性不仅可以允许基因开启和关闭的转变,而且产生足够的基因表达产物以及产物数量与效应之间的惯性情况,从而能更精确的进行目的基因的调控。

        规律成簇的间隔短回文重复CRISPR与催化功能失活的“deadCas9——dCas9组合,可以在gRNA的指导下与特定靶向的DNA紧紧结合,通过dCas9蛋白与不同效应结构域连接实现靶基因表达的调节。当dCas9与转录抑制子连接时,可抑制转录起始,沉默靶基因表达,该行为称为CRISPR干扰(CRISPRi);当dCas9与不同的转录激活子连接时,可发挥上调目的基因表达的作用,该行为称为CRISPR激活(CRISPRa)。

      华腾生物为客户提供感兴趣基因的可调控基因编辑细胞系构建服务。一方面,采用PiggyBac转座子载体,可使携带Tet-On调控元件的外源基因在细胞中稳定高效表达。另一方面,采用CRISPRi系统能有效抑制功能基因表达,而CRISPRa系统则可上调靶基因表达,从而实现对内源基因的精准表达调控。


服务优势

1. 外源基因的永久整合:PiggyBac转座子载体可将目的基因稳定地整合到宿主细胞的染色体中,从而实现目的基因的永久表达。

2. 内源基因的可逆性表达调控:dCas9介导的基因调控是可逆的,不会永久地修饰基因组DNA

标准化及可优化性:标准的操作与严格一致的实验条件,保证基因编辑细胞系的稳定性;成熟的技术平台,可轻松将Tet-on调控元件替换为客户感兴趣的调控表达系统。


服务流程:

  

        

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